上海昌吉在本文介绍了可以调节染色温度和时间的恒温水浴箱,观察恒温水浴加热法对结核杆菌抗酸染色效果的影响,因为传统的抗酸染色法是结核杆菌细菌学检查方法。经典的妻—尼氏抗酸染色法操作过程较复杂,存在以下缺点:酒精灯加热时间长,难以掌握染料用量,染料容易溢出玻片,沾污实验台或地面;加热时染液容易干涸,须不断补加染料;染色在开放环境进行,容易造成结核杆菌播散污染环境。现将结果报道如下。
1恒温水浴加热法抗酸染色
将固定后的模拟痰标本玻片放入自制恒温水浴箱的托盘内,滴加石炭酸复红染液,盖上托盘盖;开启恒温水浴箱电源开关,调节温度旋钮(设定50、60、70、80℃)和定时旋钮(设定5min或10min);温度达到设定温度后,仪器开始自动计时,到达设定时间后仪器报警器铃响,关闭电源开关,取出玻片,加酸性酒精脱色1min,流水冲洗后美蓝复染30s,干燥后用显微镜油镜观察细菌染色性和形态。
2 结果
采用恒温水浴箱加热法对结核杆菌进行抗酸染色,染色时间为10min,染色温度分别为50、60、70℃和80℃,染色结果见图1。图1结果显示,70℃恒温水浴染色(图1-C)效果良好,菌体形态清晰,色泽明亮;60℃恒温水浴染色(图1-B)效果一般,菌体形态可辨,色泽偏暗;50℃和80℃恒温水浴染色(图1-A和D)效果差,可辨别的菌体较少,色泽淡染。
图1 不同温度下结核杆菌抗酸染色结果
3 讨论
近年来,全球结核疫情明显回升,结核病已成为了全球关注的公共卫生与社会问题[3],结核杆菌的细菌学检查愈加重要。结核杆菌对酸碱有较强的抵抗力,一般染料难以进入菌体,故结核杆菌着色困难。在染色过程中进行一定程度的加热处理,可以协助染料进入菌体。传统加热方法采用酒精灯火焰加热,火焰温度过高,温度难以控制且加温过程不稳定,染液易在玻片上干涸。本文使用恒温水浴箱加热法对结核杆菌进行抗酸染色效果观察,结果表明:恒温水浴加热温度70℃、染色10min时,结核杆菌染色阳性率高,染色鲜艳,对比度好,背景清晰。恒温水浴加热温度50℃、染色10min时,菌体染色效果不明显,可能是由于结核杆菌菌体含有大量脂质,在较低温度条件下染料无法进入菌体细胞内。恒温水浴加热温度为80℃、染色10min时,染色效果不明显,可能是由于温度过高造成菌体结构被破坏。本文建立的恒温水浴箱加热法,一方面克服了传统妻—尼氏抗酸染色法的弊端,另一方面还能同时对多份标本涂片进行染色,明显提高工作效率。总之,恒温水浴箱加热抗酸染色法具有染色稳定性好、安全、环保、清洁等优点,值得推广应用。
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