一、沙门菌的检验
沙门菌广泛存在于自然界中，是重要的肠道致病菌，可引起传染和流行。沙门菌属是一群符合肠杆菌科定义并与其血清学相关的革兰阴性、需氧性、无芽孢杆菌。本菌属种类繁多，抗原结构复杂，现已发现2000多个血清型，我国已发现血清型近200个。形态特征：革兰阴性，大小为（1～3）um×（0.4～0.9）um的两端钝圆的短杆菌，无芽孢，一般无荚膜，除鸡沙门菌和雏沙门菌以外，均周身有鞭毛，运动力强。培养特性：沙门菌需氧或兼性厌氧，10～42℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。营养琼脂平板上：35～37℃培养18～24h，其菌落大小一般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生化特性：绝大多数沙门菌有规律地发酵葡萄糖产酸产气，但也有不产气者，不发酵蔗糖和侧金盏花醇，不产生吲哚，不分解尿素。
沙门菌的检验应注意以下几点。
① 冷冻样品解冻需在45℃以下，于有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在2～8℃，18h内软化。
② 为保证检验的准确性，必须在选择性培养基上挑取足够数量的菌落进行生化和血清学鉴定。进行生化反应时，应以纯培养物进行试验，如出现血清学阳性，而生化反应特征不符合时，应对接种物进行纯化，用纯化后的培养物重新进行生化试验。
1、仪器与试剂
1）仪器
托盘天平；均质器或乳钵；电热培养箱；显微镜；灭菌广口瓶；灭菌三角烧瓶；隔膜真空泵；灭菌平皿；灭菌小试管；灭菌毛细吸管；载玻片；酒精灯；灭菌金属匙或玻璃棒；接种棒；镍铬丝；试管架。
2）培养基和试剂
缓冲蛋白胨水；氯化镁孔雀绿（MM）增菌液；硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液；亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液；亚硫酸铋琼脂（BS）；DHL琼脂；HE琼脂；SS琼脂；三糖铁（TSI）琼脂；蛋白胨水；尿素琼脂；氰化钾（KC）培养基；氨基酸脱羧酶试验培养基；糖发酵管；缓冲葡萄糖蛋白胨；丙二酸钠培养基；氧化酶试剂；革兰染色液；沙门菌因子血清。
2、常规检验方法
1. 样品的采集及处理
应采集可疑食品或可疑带菌者的新鲜粪便进行检验。检查带菌者时也可用肛拭取样（经干热无菌的棉拭先用保存液或增菌液湿润，深入肛门内7～10cm处采样）。样品若不能及时检验，应将样品放入保存液中，置40℃的冰箱内保存。
2. 增菌培养
（1）前增菌 对于经过烘烤加热或冷冻的食品样品，食品中的沙门菌由于加工过程中受到“致伤”而处于濒死状态。故为了分离出食品中的沙门菌，必须对加工过的食品进行前增菌，使沙门菌恢复其活力。
（2）增菌 其目的是使沙门菌以外的细菌（主要是埃希菌属）受到抑制，而使沙门菌得到一定的增殖，提高沙门菌的检出率。
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品和原料，不必经过前增菌各取上述检样25g（或25mL）加入盛有灭菌生理盐水25mL的锥形瓶中，制成均匀样液，取半量接种于100mL氯化镁孔雀绿（MM）增菌液或四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液内，于42℃培养24h；另取半量接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内于36℃±1℃培养18～24h，增菌培养基的效果应先加以测定，而且还应考虑到如果增菌的目的菌是伤寒沙门菌，应以37℃为佳，而其他沙门菌则以42℃为佳。
3. 分离培养
取增菌液一环，划线接种于沙门菌选择性培养基上，如亚硫酸铋琼脂（BS）、DHL琼脂、HE琼脂、SS琼脂。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上，于36℃±1℃分别培养18～24h（DHL，HE，SS）或40～48h（BS），观察各种平板上生长菌落的特征。
4. 生化试验
挑取上述选择性琼脂平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂斜面（先涂布斜面，后穿制底层），一般应多挑几个菌落，以防遗漏。在三糖铁琼脂斜面内，只有斜面产酸并同时硫化氢（H2S）阴性的菌株可以排除，其他反应结果均有沙门菌存在的可能，同时也均有不是沙门菌的可能，因此都需要做几项最低限度的生化试验，必要时做涂片染色镜检应为革兰阴性短杆菌，做氧化酶试验应为阴性。在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白陈水（供做基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各一管，于36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长到48h。
5. 血清学分型鉴定
（1）抗原的准备
一般采用1.5％琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2.5％～3％）培养基上再检查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时，可挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。
H抗原发育不良时，将菌株接种在0.7％～08％半固体琼脂平板的中央，待菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻璃管1～2次，自远端取菌培养后再检查。
（2）O抗原的鉴定
用A-F多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水对照。在生理盐水中自凝者为粗糙型菌株，不能分型。被A～F多价O血清凝集者，依次用O4、03、010、O7、O8、O9、O2和O11因子血清做凝集试验。根据试验结果，判定O群被O3、10因子血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4各亚群，每一个O抗原成分的最后确定均应根据O单因子血清的检查结果，没有单因子血清的要用两个O复合因子血清进行核对。不被A～F多价O血清凝集者，先用57种或144种沙门菌因子血清中的7多价O血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O群血清逐一检查，以确定O群。
